案例分享|为度乳胶微球在胱抑素C检测中的应用

胱抑素 C （ CysC ）又 被称作半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白 C ， 是一种由 1 20 个氨基酸残基构成的多肽链，可由机体内所有核细胞产生，产生率恒定。由于其分子量较小，可以自由的经肾小球滤过，然后被近端小管重吸收后直接降解掉 [ 1] 。与肌酐等诊断早期肾损伤的指标相比，胱抑素 C 不被肾小管分泌，且在人体内产生的量基本保持稳定，不受年龄、饮食、炎症等其他因素影响，因此能够更好的反应肾小球滤过率（ GFR ） [ 2] ，在各种疾病造成的肾脏早期功能损伤的诊断、治疗及预防方面具有重要的临床意义。

人胱抑素C二聚体形式 [ 3]

胶乳增强免疫比浊是测定胱抑素 C 的主要方法

胱抑素 C 作为肾小球滤过率标志物，多采用免疫学方法进行测定，如单向免疫扩散法、放射免疫法、酶联免疫吸附、胶乳增强免疫比浊法等。其中，胶乳增强免疫比浊法可使用全自动生化分析仪快速而准确地对胱抑素 C 进行测定，因此在大批量的临床样本检测中应用广泛。

为度乳胶微球在胱抑素 C 检测中的应用

基于为度生物推荐的乳胶微球偶联工艺（ https://mp.weixin.qq.com/s/GCpojegj8AgELxjnzfH82g ），将 VDO 100nm乳胶微球（货号：PS0100CHA ）在 CysC项目中的检测性能进行验证，结果展示如下：

1、 定标数据

方法： 取 CysC校准品，用迈瑞生化仪BS450进行定标。

校准品浓度 (mg/L)

△Abs

0

11

0.5

361

1

835

2

2050

4

4832

8

7197

8/4

1.49

空白吸光度

4876

2、 精密度

方法： 用校准品稀释液将抗原稀释至低、中两个浓度，每个浓度重复测试 10次。

低值样本

（浓度 0.5 mg /L ）

中值样本

（浓度 2mg/L ）

1

0.49

1.96

2

0.51

1.97

3

0.49

1.97

4

0.50

1.96

5

0.49

1.96

6

0.49

1.96

7

0.50

1.97

8

0.49

1.97

9

0.49

1.95

10

0.48

1.95

AVE

0.49

1.96

STDEV

0.01

0.01

CV

1.67%

0.36%

结果： 低值样本和中值样本的变异系数（ CV）分别为 1.67% 和 0 .36% ，满足批内精密度 CV≤ 5% 的要求。（标准要求参考 A公司胱抑素C测定试剂盒说明书）

3、 分析灵敏度

样本浓度（ mg /L ）

吸光度变化

检测样本

1.15

0.098

换算为标准样本

1.00

0.085

结果： 测定浓度 1 .00mg/L 的待测物时，吸光度差值（ △A）为 0.085 ，在 0 .010-0.200 范围内，满足要求。（标准要求参考 A公司胱抑素C测定试剂盒说明书）

4、 线性范围

方法： 使用抗原配制浓度为8mg/L的校准品， 之后用校准品稀释液依次稀释至 4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0mg/L。对上述7个浓度点进行检测，每个浓度点测试2次，计算均值。以稀释浓度为自变量，以测定结果均值为因变量求出线性回归方程并计算线性回归的相关系数（r）。

理论浓度（ mg /L ）

实测浓度（ mg /L ）

实测浓度均值（ mg /L ）

拟合值（ mg /L ）

绝对偏差 ( mg/L)

相对偏差

r值

0

0.00

0.00

-0.01

-0.01

/

0.9999

0.00

0.25

0.24

0.24

0.24

0.00

/

0.24

0.5

0.50

0.49

0.50

0.01

/

0.48

1

1.01

1.00

1.01

0.01

/

0.99

2

2.01

2.02

2.02

0.01

/

2.02

4

4.08

4.07

4.05

/

-0.51%

4.06

8

8.04

8.10

8.11

/

0.10%

8.16

结果： 线性相关系为 0 .9999，满足在[0.40,7.50]mg/L的范围内，理论浓度与实测浓度的线性相关系数r不小于0.9900的要求。线性绝对偏差满足在[0.40,2.00]mg/L区间内，不超过0.20mg/L；（2.00,7.50]mg/L区间内，线性相对偏差不超过±10%的要求。 （标准要求参考 A公司胱抑素C测定试剂盒说明书）

5、 加速稳定性

方法： 将试剂分为两组，分别置于 37℃加速和 4℃存放。在第 8天，将两组试剂取出进行定标，同时检测质控品，计算测值偏差。

结果： 37℃加速8天与未加速的试剂相比，对两个质控品的测值相对偏差均小于10%，满足要求。

6、 结论

使用为度生物推荐的偶联工艺，将 VDO乳胶微球制成CysC测定试剂，其精密度、分析灵敏度、线性范围和加速稳定性等均能达到行业内同类产品标准。

为度助力客户应对机遇与挑战

由江西省牵头开展的肾功和心肌酶生化类检测试剂集采正在稳步推进，持续优化成本结构成为生化试剂厂家的迫切需求。为度生物乳胶微球作为生化试剂的关键原料，具有粒径均一、功能基团稳定可控、批间重复性好、可大规模稳定供货等优势。为度生物可以提供微球产品及完整解决方案，全面助力客户快速实现关键原料进口替代，进一步降本增效。

为度乳胶微球产品推荐

【1】 Bargnoux AS, Barguil Y, Cavalier E, Cristol JP. Estimation of glomerular filtration rate using cystatin C. Ann Biol Clin (Paris). 2019 Aug 1;77(4):375-380.

【2】 Kirelik D, Fisher M, DiMaria M, Soranno DE, Gist KM. Comparison of creatinine and cystatin C for estimation of glomerular filtration rate in pediatric patients after Fontan operation. Congenit Heart Dis. 2019 Sep;14(5):760-764.

【3】 Onopiuk A, Tokarzewicz A, Gorodkiewicz E. Cystatin C: a kidney function biomarker. Adv Clin Chem. 2015;68:57-69. doi: 10.1016/bs.acc.2014.11.007.