293T细胞培养攻略

表1 293T细胞基本信息

名称

293T [HEK-293T] （人胚肾细胞）

形态

上皮样

生长特性

贴壁

营养体系

DMEM（abs9483）+10% FBS（abs972）+1% 双抗（abs9478）

图1 293T [HEK-293T] （人胚肾细胞）

一、首先我们讨论的是 为啥293T细胞传代后聚团严重？ 如图2所示，背景贴壁细胞贴壁良好，形态正常，而黄色团块则是因为 消化不当 形成的细胞团，难以贴壁，并出现了 成簇增殖 。

图2 293T [HEK-293T] （人胚肾细胞）

这种情况多半是 胰酶消化操作不当 导致的细胞聚团：

1）消化过度或吹打过猛导致细胞受伤严重，破损的细胞碎片容易粘连聚团；

2）消化时细胞融合率太高，成片脱落，将不容易被吹散，容易聚团。

解决细胞消化不当，要考虑细胞的 生长特性 ，鉴于该细胞贴壁疏松，普通0.25%胰酶消化时间控制在15s-30s；吹打动作轻柔，控制在10-20次；细胞融合率达到80%传代即可传代。

二、接下来咱们要讨论的是 为啥293T换了血清批次后聚团严重？ 如图3所示，换血清批次后严重聚团的293T细胞，细胞形态难以分辨，黏附在一起。 导致细胞聚团的因素很多，其一是 血清批间差 导致细胞聚团。

血清来源于 动物 ，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。293T细胞本身有 聚团生长 特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。

图3 换血清批次后严重聚团的293T细胞

如何有效地预防血清批间差呢？ 可以通过先用 血清试用装 ，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积 半年或一年 的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。

三、接下来我们要讨论的是 293T细胞贴壁性问题 。通常有 两种情况 ，

第一种情况是 为啥用了新批号的血清，细胞贴壁性变差？ 如图4所示，贴壁疏松的293T细胞。

图4 贴壁疏松的293T细胞

这种情况大概率是 血清存在批间差异 ，而293T细胞本身特点就是 贴壁性差 ，对不同批次的血清适应性不同，就容易出现贴壁疏松现象。可适当加高血清比例（最高不超过20%）；建议试好一个血清批次多屯一些，可以避免血清批间差对细胞的影响。

第二种情况是 为啥293T细胞从瓶里（例如T25）铺板到孔里（96孔板），贴壁性变差？ 这种情况排除掉瓶和孔板本身材质或TC（亲水处理）处理因素外，293T细胞贴壁性变差极有可能是因为 空间的隔离 导致细胞自分泌或旁分泌产生的信号分子浓度太低，不利于细胞的贴壁或增殖。建议在铺板前，对孔板进行明胶（ ）包被，可有效促进细胞贴壁。

四、最后咱们要讨论的是 转染病毒后细胞凋亡严重 ，如图5所示，是经病毒转染后漂浮凋亡的293T细胞。

图5 经病毒转染后漂浮凋亡的293T细胞

为啥293T细胞转染病毒后凋亡严重？ 在排查了方法步骤和转染试剂，依然没有改善的情况下，可排查一下转染前的 营养体系 ，尤其是血清批间差带来的影响。很多同学说前期培养细胞形态正常呀，其实 细胞形态学 只是鉴别细胞是否健康的一个外在指标，还要结合细胞其它指标对细胞健康进行评定（比如倍增时间，存活率）。通过更换血清批次，再进行转染实验并观察转染后的效果，比较分析出原因。

本期讲解就到这里了，下一期您想了解哪种细胞的培养攻略呢？欢迎留言评论哦。如有细胞培养问题，欢迎扫码加入我们微信群交流哦。

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货号

品名

规格

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胎牛血清（特级）

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胎牛血清（优级）

500ml

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胎牛血清（标准级）

500ml

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高糖DMEM培养基

500ml

abs9484

RPMI-1640培养基

500ml

abs9505

MEM培养基

500ml

abs9506

α-MEM培养基

500ml

abs9554

Ham's F-12培养基

500ml

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Ham's F-12K培养基

500ml

abs9561

DMEM/F-12培养基

500ml

abs962

1 x PBS缓冲液

500ml

abs970

D-PBS缓冲液（不含 Ca 2+ Mg 2+ ）

500ml

abs971

D-PBS缓冲液（含 Ca 2+ Mg 2+）

500ml

abs9257

Hanks平衡盐溶液（不含 Ca 2+ Mg 2+）

500ml

abs9258

Hanks平衡盐溶液（含 Ca 2+ Mg 2+）

500ml

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胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%） ，含酚红

100ml

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胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），不含酚红

100mL

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无DMSO无血清细胞冻存液

100mL

abs9417

无血清细胞冻存液

100mL

abs9473

细胞冻存液（含血清）

100mL

abs9474

组织保存液

100ml

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组织冻存试剂盒

30ml

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模具

1个/套

abs9487

小刀

5片/包

abs9481

组织复苏试剂盒

50ml

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卡那霉素B硫酸盐

250mg

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硫酸庆大霉素溶液

10ml

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青霉素-链霉素溶液（100 x 双抗）

100ml

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青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液

100ml

abs42013298

两性霉素B

1g

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制霉菌素

1g

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青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液

100ml

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支原体检测试剂盒

100T

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支原体清除试剂

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支原体预防

500uL×4

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环丙沙星盐酸盐

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