为度生物乳胶微球偶联工艺推荐

一、为度生物乳胶微球偶联工艺推荐

1. 缓冲液配制

1.1 微球稀释液： 10mM MES ， 350mM 氯化钠， pH 6.0 ；

1.2 抗体稀释液： 50mM 硼酸， 350mM 氯化钠， pH 8.0 ；

1.3 EDC 溶液： 5mg/mL 的 EDC 溶液，用去离子水配制，现配现用；

1.4 NHS 溶液： 5mg/mL 的 NHS 溶液，用去离子水配制，现配现用；

1.5 封闭液： 200mM 甘氨酸缓冲液， 20%BSA ；

1.6 R2 保存液： 20mM TAPS ， 5% 蔗糖， 0.5% BSA ， 0.1% ProClin 300 ， pH8.0 ；

2. 偶联流程

（该流程可用于将 0.6mg 抗体偶联到 8mg 微球上，具体的微球用量、抗体用量、缓冲液 pH 值和 EDC 投入量需根据实际情况进行优化。）

2 .1 微球稀释：取 920 μ L 微球稀释液于 5mL 烧杯中（含有转子），加入 80 μ L 微球（固含 10% ），置于磁力搅拌器上，充分混匀 10min ；

2.2 活化：在磁力搅拌状态下，逐滴加入 32 μ L NHS 溶液，充分混匀，再逐滴加入 16

μ L EDC 溶液，室温活化 15min ；

2 .3 微球与抗体偶联：取 0.6mg 抗体，用抗体稀释液稀释至 1m L 。在磁力搅拌状态下，将其逐滴加入上述 2 .2 步骤活化后的微球中，室温偶联 2.5h ；

2.4 封闭：在磁力搅拌状态下，加入 160 μ L 封闭液，室温封闭 1h ；

2.5 反应结束后，在 10000 × g 下，离心 10min ；

（注：离心力和离心时间需根据球的粒径大小来调整。若微球的粒径大，可适当减少离心力和离心时间，使微球全部沉淀，上清液为透明液体即可。）

2.6 去除上清液，加入 4mL R2 保存液。用超声细胞破碎机进行超声，设置功率 3 0% （ ~30 0 W ），超声 3 s/ 间隙 3 s ，超声总时间 2min 。

二、乳胶微球验证数据

基于上述乳胶微球偶联工艺，我们在胱抑素 C （ Cy sC）项目上做了与进口微球反应性对比验证、更换不同抗体后的反应性验证以及批间重复性验证。实验数据展示如下：

1、 反应性对比

在 CysC 项目上，对比 VDO 100 nm 乳胶微球（货号： PS0100CHA ）和竞品 J 品牌100 nm 乳胶微球的反应性。

结果显示： VDO 乳胶微球与同粒径竞品 J 微球相比，具有更好的反应性。

2、 更换不同抗体后反应性验

将同一批次的 VDO 100 nm 乳胶微球（货号： PS0100CHA ） ，在相同的偶联工艺下，通过更换不同品牌的抗体，做反应性验证，并与成品试剂对比。

结果显示：相同的微球偶联工艺下，使用不同厂家的抗体， VDO 乳胶微球所制备的试剂反应性均高于对照成品试剂。

3、 批间重复性

随机选取三个批次的 VDO 120 nm 乳胶微球（货号：PS0120CHA ），在 CysC 项目上进行反应性测试。

抗原浓度（ mg /L ）

批次 1

批次 2

批次 3

CV

0

36

49

56

-

0.5

376

408

384

4.28%

1

915

950

883

3.66%

2

2310

2284

2187

2.87%

4

5567

5196

5361

3.46%

8

8755

7928

8654

5.34%

结果显示： VDO 乳胶微球具有良好的批间重复性。

三、常见问题

1 .当抗体的厂家、种类或微球的粒径更换后，上述偶联工艺可能出现不匹配的现象，导致偶联后的试剂灵敏度、线性、稳定性无法满足要求，若出现类似的情况，可从以下几点进行优化：

（ 1 ）重新摸索微球、抗体、活化剂的量，从而筛选出最优条件。

（ 2 ）改变抗体稀释液的种类或 pH 值，如：将抗体稀释液改为 MES 、 MOPS 等缓冲液 。

2 . 出现聚集现象：

（ 1 ）加入活化剂后出现聚集，可通过减少活化剂的量、调整微球稀释液 pH 值进行优化。

（ 2 ）加入抗体后出现聚集，可通过调整微球稀释液浓度或 pH 值、更 换抗体稀释液的种类和 pH 值等条件进行优化。

四、乳胶微球订购信息：

货号

粒径

固含

规格

PS0080CHA/CLA

8 0 n m

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0100CHA/CLA

100nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0120CHA/CLA

120nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0150CHA/CLA

150nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0180CHA/CLA

180nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0200CHA/CLA

200nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0300CHA/CLA

300nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L

PS0400CHA/CLA

400nm

1 0%

10m L ,100m L ,1000m L